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  2. 微生物腐蝕的檢測方法和預測模型
    2024-08-06 14:44:01 作者:戚鵬,王鵬,等 來源:腐蝕與防護 分享至:

     

     

    生物腐蝕(MIC)是指由微生物或其代謝產物引起或加速的金屬或其他材料的腐蝕過程,是一種普遍存在的嚴重腐蝕形式,廣泛發生在石油、天然氣、化工、海洋和水處理等領域,可對設備和環境造成重大損失和危害。MIC可導致巨大的經濟損失,約占全部腐蝕損失的20%。因此,MIC的檢測與控制是工業腐蝕科學面臨的核心難題。

    在水環境中的異質材料表面可以很快形成生物膜細菌聚集體。胞外聚合物(EPS)和微生物細胞組成的生物膜可以為微生物提供有利的生存環境,抵御外部惡劣環境的干擾。

    而且,生物膜內部相對隔絕的環境有利于微生物的代謝活動,從而改變生物膜內的局部微環境,影響腐蝕機理。

    此外,生物膜內菌體體系復雜,常存在多種微生物,如硫酸鹽還原菌(SRB)、 鐵氧化菌(IOB)、錳氧化菌(MOB)、硫酸鹽氧化菌(SOB)、酸生成菌(IPB)等,微生物之間的協同共生也會改變生物膜內的環境參數,進而加速腐蝕過程。

    鑒于MIC過程的復雜性,開發MIC的檢測與控制技術是工業腐蝕科學面臨的核心難題。


    近年來,雖然研究人員對MIC機理進行了大量研究,但由于MIC系統包含多種微生物,受多因素影響,其腐蝕機制尚未完全闡明。針對MIC過程的危害性和不確定性,采用可靠的檢測技術對其進行檢測顯得尤為重要。

    近年來,許多新技術應用于MIC檢測,如電化學技術、顯微技術、生物分析技術等。這些技術可以檢測腐蝕電化學行為、直接觀察樣品變化、分析微生物種類等,為研究MIC過程提供重要信息。

    但是,各類技術手段也存在自身的局限性,如檢測范圍小、分辨率有限、需要外界擾動等。因此,需要多種技術的聯合應用才能對復雜的MIC系統進行全面的表征。

    此外,預測和模擬MIC的現象和機制,是有效診斷和防治MIC的重要手段,也是腐蝕科學和工程的熱點和難點問題。為了預測和模擬MIC,許多學者提出了不同類型的模型,從不同的角度和層次描述和解釋了MIC的影響因素和過程,為MIC的研究和應用提供了有價值的信息和建議。

    然而,由于MIC的復雜性和多樣性,沒有一個模型能夠完全解釋和預測MIC的現象,不同類型的模型各有優缺點和適用范圍,需要根據不同的目的和條件來選擇合適的模型,或者結合多種模型來提高MIC的診斷和防治的效果。

    Part.01

    MIC的檢測方法

    1

     

    電化學檢測法

    電化學檢測法是通過測量樣品的電化學反應來監測和表征金屬腐蝕的過程和機理。常用的電化學方法包括開路電位法、電化學噪聲法、線性極化電阻法、動態極化法和電化學阻抗譜法等。

     

    開路電位法的原理是測量金屬樣品與參比電極之間的穩態電位差,來反映樣品在腐蝕介質中的電化學行為。電化學噪聲法通過檢測電位和電流的隨機擾動,可以判斷腐蝕類型是均勻腐蝕還是局部腐蝕。線性極化電阻法給樣品施加很小的電位擾動,測量對應電流變化,由此監測瞬時腐蝕速率。動態極化法在穩態條件下施加較大的電位擾動,考察整個腐蝕反應過程。電化學阻抗譜法通過施加交變電位,測量響應電流,獲得電化學反應機理信息。

    此外,絲束電極又稱微電極陣列,是由規則排列的電極絲組成的復合電極。微電極既能作為大面積電極使用,給出平均信號,又能作為獨立探頭,測試局部參數,揭示材料表面腐蝕過程的不均勻性。因此,絲束電極技術在MIC研究中廣泛應用。

     

    中科院海洋所研究團隊利用絲束電極監SRB生長周期中銅的整體和局部電化學過程,如圖1所示,隨著浸泡時間增加,在SRB指數生長期,最大電流密度值從0.21 μA·cm-2增加到0.87 μA·cm-2,在穩定期穩定在0.70 μA·cm-2, 然后在衰亡期下降到0.17 μA·cm-2。結果表明,最大電流密度與SRB的代謝過程相關。此外,SRB生長過程中,陽極位置隨浸泡時間變化。

     

    圖1 基于絲束電極測試SRB引起的腐蝕狀態

     

    電化學檢測法的優勢在于操作簡便、可以實現連續監測,已廣泛應用于評價金屬材料電化學行為、判斷腐蝕類型與位置、動態監測腐蝕速率以及考究腐蝕機理。但是電化學方法也存在一些局限性,如部分方法需要施加外部擾動,可能影響穩態過程;數據分析和結果解釋復雜,對局部腐蝕的監測效果較差,重復性存在一定問題。

    2

     

    生物分析法

     

    MIC的特點是微生物群落與金屬材料之間的復雜相互作用,準確分析微生物群落的組成對于理解MIC的發生機制至關重要。

     

    微生物群落不僅在種類上多種多樣,而且在不同的環境條件下展現出不同的生態功能,即通過特定的代謝途徑影響金屬材料的腐蝕過程。因此,需要對每個特定環境的微生物群落進行詳細分析,以便為MIC控制提供針對性的策略。
    生物分析法是通過分析樣品中微生物的種類、數量和代謝活性來表征MIC過程。這類方法主要包括基因組學分析和代謝組學分析。基因組學分析PCR和基因測序,可以識別品中的微生物類型,定量分析不同微生物的相對豐度,為判斷MIC相關微生物提供依據。代謝組學通過色譜-質譜等技術分析樣品中的化學成分,可以揭示微生物群落的代謝通路和活性。

     

    中科院海洋所研究團隊采用高通量測序法分析了天然海水中硝酸鹽添加對EH40鋼試樣表面腐蝕產物內微生物群落結構的差異,如圖2所示。研究發現,在所有海水體系中,EH40鋼表面微生物群落豐度最高的屬為Cupriavidus,其次是Pelomonas,這兩個屬的細菌可進行有氧呼吸。在未添加硝酸鹽的海水中,試樣表面微生物群落結構中的硝酸鹽還原菌屬主要是Ralstonia和Sulfurimonas。添加0.1和1 mM硝酸鹽后,硝酸鹽還原菌的優勢菌屬不變。當添加量為10 mM硝酸鹽時,除了Ralstonia和Sulfurimonas外,優勢菌屬中還出現了Thiomicrospira屬。進一步增加添加量至100 mM硝酸鹽時,硝酸鹽還原菌屬主要是Ralstonia、Thiomicrospira和Pseudomonas。硝酸鹽的添加不僅導致了硝酸鹽還原菌屬的變化,還影響其豐度。

    圖2 EH40鋼在添加不同濃度硝酸鹽的海水中浸泡12周后表面微生物群落在屬分類水平上的比較

    生物分析法可以研究MIC過程中微生物群落的遺傳多樣性和功能特性,從而理解微生物與金屬材料相互作用的復雜性。

    DNA測序技術可以識別和量化難以培養的微生物種群,而宏基因組學則提供了群落中所有基因的全面視圖,揭示了微生物群落的代謝潛力和生態功能。此外,代謝組學技術的應用,通過分析微生物群落的代謝產物,進一步補充了對微生物活動狀態的理解,為評估微生物腐蝕的生物化學機制提供了直接的代謝證據。但是也存在一些局限性,如需要優化核酸提取和化學成分分析的樣品前處理方法,數據處理和解釋復雜,需要專業知識,設備和試劑耗材成本高。

     

    3

     

    輻射檢測法

     

    輻射檢測技術通過利用X射線、紫外線等電磁輻射的吸收、衍射、熒光等效應來分析樣品的化學組成和結構。常用技術包括X射線衍射(XRD)、X射線光電子能譜(XPS)、能量色散譜(EDS)、拉曼光譜和紫外可見光譜分析(UV-vis)。

     

    XRD可用于評估樣品的晶體結構和化學組成,揭示不同環境下的相變和成分信息,為腐蝕機理和速率提供證據。XPS可分析樣品表面薄層的化學狀態及相對組成,評價微生物誘導的表面化學變化。EDS可用于比較基本元素組成,識別腐蝕沉積物,結合電子顯微鏡評估微生物學影響。拉曼光譜和UV-vis可用于表征無機腐蝕產物和有機物細胞外聚合物的組成。

     

    劉宏芳研究團隊在研究SRB對富集人工海水中2205不銹鋼和X52碳鋼之間電化學腐蝕的研究中,采用XPS技術研究了去除生物膜后2205鈍化層,如圖3所示。研究表明,在無菌和SRB培養基中,2205不銹鋼和X52碳鋼耦合后,表面O2-/OH-和Fe3+/Fe2+的比率均有所下降。O2-和Fe3+含量的減少可能是由于Fe(III)氧化物的減少造成。

     

    圖3 去除生物膜后2205不銹鋼表面鈍化層的O 1s、Fe 2p XPS譜圖、O2-/OH-和Fe3+/Fe2+的相應比率
    輻射檢測法可以對MIC過程中腐蝕產物和生物膜的化學成分進行表征,揭示MIC的化學過程。它們的優點是原理簡單,可以快速掃描樣品化學信息。但也存在一些局限性。如XRD成本低但分辨率有限,XPS可評估成分但空間覆蓋有限,EDS可提供微觀信息但需要復雜數據分析。綜合運用這些技術可全面評估微生物腐蝕過程中的樣品化學變化。

    4

     

    顯微技術

     

    顯微技術的共同原理是通過各種顯微儀器直接觀察樣品的形貌、組織結構、微生物分布等信息,從而直接觀察樣品表面變化、生物膜形成及微生物分布情況,對MIC過程進行表征。常用的顯微鏡技術包括掃描電子顯微鏡、環境掃描電子顯微鏡、原子力顯微鏡和共聚焦掃描激光顯微鏡。

     

    掃描電子顯微鏡可快速獲得高分辨率的金屬基體微觀形態圖像,直接觀察識別微生物活性對腐蝕的影響,但可能會對脆弱的生物樣本完整性造成一定損傷。原子力顯微鏡是一種靈敏的表面形貌和力學性質定量分析技術,可精確評估異質性生物膜對金屬基體的粘附力大小和腐蝕缺陷尺寸,但其取樣和分析范圍較小。光學顯微鏡操作簡便快速,可用于現場直接評估腐蝕表面情況,但分辨率較低,獲得的信息不夠明確直接。共聚焦掃描激光顯微鏡可非破壞性地獲得生物膜三維結構和腐蝕微觀形貌的深度信息,但需要復雜的樣本制備過程和較高的操作技術。

     

    顯微鏡技術是微生物腐蝕研究中最常用的表征手段之一。但這類技術也存在一些內在的局限。首先,顯微技術的觀察范圍有限,僅能提供金屬樣品局部區域的信息,難以反映整體腐蝕態勢;其次,部分顯微技術需要對樣本進行復雜的前處理或制備,這可能會對脆弱的生物樣品完整性產生一定的破壞或影響;再者,一些高分辨率的顯微技術操作較為復雜,需要專業的實驗人員進行;最后,部分顯微系統需要工作在真空條件下,儀器和維護成本也非常昂貴。

     

    5

     

    生物傳感法

     

    生物傳感器是一門由化學、物理學、生物學、材料學等交叉形成的一門學科,是介于信息學和生物技術之間新的研究熱點,具有特異性高,靈敏度高,分析速度快,準確度高,成本低廉等優點,在食品檢測、生態環境科學、醫藥科學等領域發揮了不容忽視的作用。

     

    中科院海洋所研究團隊針對微生物腐蝕檢測的難題,開發了一系列針對微生物體系的生物傳感方法。首先,從微生物特異性識別角度出發,針對不同應用場景開發了針對腐蝕微生物的快速傳感方法,揭示了其對腐蝕微生物細胞結構、代謝活性和遺傳序列的識別模式和作用機制,實現了典型腐蝕微生物的快速檢測。

     

    此外,針對材料表面生物膜內腐蝕微生物的代謝活性難以測定的難題,開發了適用于生物膜體系的腐蝕微生物活性的生物傳感方法。具體內容包括開發了高柔韌性全固態離子選擇性微探針,采用熱力學驅動的電位測試模式,通過引入石墨烯固態轉換層,實現了對活性分子識別過程的界面離子/電子快速轉換,擺脫了內充液對電極基底尺寸和韌性的束縛;開發了基于MOF靶向裂解及酶釋放的便攜式活性試紙條,建立了靶標分子濃度與體系顏色/擴散性的密切關聯,實現了生物膜內靶標分子的可視化測定,如圖4所示。

     

    圖4 基于MOFs調節水凝膠黏度和納米酶活性的ATP檢測試紙條的構建原理圖

     

    生物傳感技術作為一種先進的分析工具,在微生物活動和環境參數的原位監測方面展現出顯著的效能,能夠精確捕捉生物膜內微生物代謝活動和腐蝕過程的動態變化。生物傳感技術能夠提供較高的空間分辨率,這對于理解微生物群落內部結構和功能分布至關重要。

     

    盡管目前可以用于生物膜微環境檢測的生物傳感器仍然較少,需要針對不同應用場景開發特定的傳感器,該技術實現過程較為復雜,需要對構建和測試過程不斷優化。但憑借其高特異性、高靈敏度、快速分析、高準確度以及低成本等優勢,生物傳感技術的研究需求日益增長。
    綜合而言,電化學技術在實時監測和材料失效表征方面具有優勢,但無法測試生物膜內的微環境狀態,且對局部腐蝕的檢測能力有限;顯微技術能夠提供直觀的形貌信息,輻射技術在化學成分分析方面具有高信息量,但這兩類方法受限于觀察范圍和可能對樣本造成損傷,不便于開展實時觀測;生物分析技術能夠深入到微生物層面,但需要專業的設備和分析人員,不便于開展現場分析;生物傳感技術在快速檢測和成本效益方面具有顯著優勢,但可能需要針對特定應用進行開發。在選擇MIC檢測手段時,需要根據具體的研究目的、條件和成本效益比進行綜合考慮,有時需要多種技術的聯合應用來全面評估MIC現象。

    Part.02

    MIC預測模型

     

    按照模型的特點和方法進行分類和排序,目前已報道的MIC預測模型可以分為三種類型:基于風險評估的模型、基于傳質過程控制的模型和基于電化學腐蝕機理的綜合模型。

     

    1

     

    基于風險評估的模型

     

    Maxwell等提出了一個基于四個因素(硫化物存在、氧氣侵入、管道清理頻率和老化程度)來評估SRB致腐蝕率的模型。該定性模型用一個四維的矩陣來表示這些因素的組合,每個單元格對應一個腐蝕等級。該模型的優點是能夠預測MIC的可能性,缺點是不能準確地估計腐蝕進展。

     

    2012年,Bernt等提出用數學公式分三步來計算MIC的風險指數(RI)和最大腐蝕坑生成速率。第一步結合qPCR技術監測SRB,硫酸鹽還原古菌(SRA)和甲烷生成菌(MET)的數量,并利用每個菌種的體積活性計算MIC風險因子;第二步計算基于上述微生物的最大腐蝕坑生成速率;最后,根據上述兩項指標評估MIC風險和采取緩釋措施。研究表明,在細菌混合菌落中,腐蝕速率增加。在此基礎上,該團隊又提出通過RT-qPCR技術區分微生物的總數量和活性數量,可以更靈敏地評估MIC風險。與僅用qPCR技術相比,該模型可以更早期預測管線MIC。
    此外,微生物誘導腐蝕的點蝕形成和生長過程具有隨機特性,因此可以采用動態概率模型,如馬爾可夫網絡、泊松回歸、佩特里網和貝葉斯網絡等方法來預測MIC的發生。在很長一段時間,基于概率學的模型被用于模擬點蝕的隨機生成和生長,但這些模型均沒有考慮微生物對腐蝕速率和故障概率的影響。
    2020年,Khan等提出了一種集成貝葉斯網絡馬爾可夫方法的預測模型,特別關注了操作參數和SRB對微生物誘導腐蝕速率的影響,以及微生物誘導腐蝕速率對長期暴露管道故障可能性的影響,用于預測微生物誘導內部腐蝕速率、故障概率以及未來腐蝕坑洞深度分布,并評估其對近海系統結構完整性的影響。微生物誘導腐蝕的影響因素采用貝葉斯網絡表示,以捕捉其動態性、非線性依賴性和相互依賴性。根據關鍵腐蝕坑洞深度狀態,采用馬爾可夫過程估計近海系統的故障特征和未來微生物誘導腐蝕坑洞深度分布。

     

    基于風險評估的模型主要用來評估MIC的可能性和危害程度,而不是具體的腐蝕速率的模型,考慮了一些影響MIC的因素,如微生物的種類、數量、活性、環境條件等,但沒有涉及電化學和傳質過程。這類模型的優點是可以快速地對MIC的風險進行評估,為腐蝕管理和防護提供參考。它們的缺點是不能提供具體的腐蝕速率和機理,也不能考慮電化學和傳質過程的影響,因此精度和適用性有限。

     

    2

     

    基于傳質過程控制的模型

     

    基于對陰極去極化機理的理解,Peng等提出結合Monod方程、硫酸鹽的傳質方程,建立預測MIC腐蝕速率的數學模型。該模型考慮了SRB在金屬表面的電化學作用,以及擴散、反應和質量傳遞等過程,能夠預測腐蝕坑的形成和發展的三個階段,但是需要很多參數和假設,且忽略了生物膜的影響。

     

    Al-Darbi等也提出了基于陰極去極化機理的數學模型,考慮了硫酸鹽在生物膜內的擴散和消耗,描述了腐蝕速率與SRB硫酸鹽消耗速率和點深度變化的依賴性,并提出由于硫酸鹽擴散的限制,點蝕坑經初期的快速生長后進入緩慢穩態生長階段。
    此外,Melchers和Wells提出的模型將MIC過程分為瞬態和準穩態兩階段建模。第一階段利用Fick擴散方程描述營養物質的瞬態擴散;第二階段近似為準穩態,腐蝕速率與營養物質濃度和鐵銹層擴散速率成正比。
    Afanasyev等提出通過活性傳質方程描述固體、生物膜和溶液三相的反應過程,進而建立MIC模型,該模型考慮了各相界面之間物質傳遞和反應,預測了生物礦化對MIC的抑制作用。

     

    盡管以上模型從不同的角度構建了基于傳質過程控制的模型,但均沒有考慮MIC過程中生物膜的動態生長過程。2015年,Haile等提出利用雙基質Monod方程描述SRB的生長動力學,進而建立MIC腐蝕速率模型,該模型考慮了生物量增長、剝落和生物膜的參數,可預測SRB附著量和腐蝕率的變化趨勢。

     

    3

     

    基于電化學腐蝕機理的綜合模型

     

    該類模型綜合考慮了更多的影響MIC的因素和機制,如生物膜的形成和變化,電化學和傳質過程,微生物的種類、數量、活性、代謝產物等,以及環境條件的變化的模型。

     

    Gu等提出了基于SRB介導的生物催化陰極硫酸鹽還原理論的MIC腐蝕模型,該模型提出電活性SRB誘導的腐蝕過程是微生物的外源呼吸過程導致的,利用Butler-Volmer方程描述電荷傳遞限制,結合營養鹽在生物膜內的傳質方程,重點考慮了生物膜-金屬間的反應動力學和營養物質在生物膜內的傳質過程。在此基礎上,又考慮了APB產生的腐蝕性有機酸對MIC的影響,使模型能夠預測更高的腐蝕率。
    Xu等提出了同樣基于腐蝕電化學原理的SRB和APB的協同作用MIC模型,預測了最壞情況下的MIC點蝕,通過假設存在侵蝕性生物膜,并簡化了生物膜內硫酸鹽的擴散和消耗過程,預測了最壞情況下MIC的點蝕速率。
    不同類型的MIC預測模型各有優缺點和適用范圍,沒有一個模型能夠完全解釋和預測MIC的現象。
    總體而言,基于風險評估的模型主要關注于快速評估MIC的風險,其優點在于能夠快速提供MIC風險的概覽,但無法提供關于腐蝕速率和機理的詳細信息。基于傳質過程控制的模型則更進一步,考慮了微生物在金屬表面的電化學作用以及與腐蝕過程相關的傳質現象,能夠預測腐蝕坑的形成和發展,但需要大量的參數和假設,并且可能忽略了生物膜的動態變化。基于電化學腐蝕機理的模型綜合了生物膜的形成和變化、電化學和傳質過程以及微生物的代謝活動等多種因素,能夠提供更為準確和詳細的腐蝕預測,但需要大量的參數輸入和解決生物膜內微環境因子的測定問題。因此,需要根據不同的目的和條件來選擇合適的模型,或結合多種模型來提高MIC的診斷和防治的效果。
    未來的研究方向和建議有以下幾點:
    (1) 發展更多的基于機理的綜合模型,以綜合考慮所有影響MIC的因素和機制,提供最準確和最完善的腐蝕預測和模擬。
    (2) 改進現有的模型的方法和技術,以提高模型的求解效率和精度,降低模型的計算量和計算時間,增加模型的穩定性和可靠性。

     

    (3) 解決生物膜內微環境因子的測定問題,獲取更多的參數和數據,以描述生物膜的特性和變化。微生物腐蝕是發生在生物膜下的腐蝕過程,而由于生物膜內微環境因子測定方法的缺失,導致無法獲得生物膜內微環境的變化規律,僅僅能通過推測估算生物膜內的微環境。因此,為了更好的解釋微生物腐蝕機理,建立可靠的預測模型,必須要解決生物膜內微環境因子的測定問題。

     

    Part.03

     

     

    結論

     

     

    MIC檢測技術包括電化學、生物分析、輻射檢測、顯微觀察和生物傳感等,各技術手段優勢互補,聯合應用可提高MIC監測效果。

    MIC預測模型包括基于風險評估、傳質過程和電化學機制的模型,每種模型均考慮了影響MIC的部分因素,但尚無單一模型可完全解釋MIC機制。

    未來的MIC檢測研究將聚焦于快速現場檢測技術的創新,致力于構建符合現場應用要求的檢測技術,以實現快速準確地進行現場監測,并評估MIC相關的風險。

    此外,微生物預測模型的發展趨勢將轉向構建基于機理的綜合性模型,并通過優化關鍵參數提升模型的效率和準確度,增強模型的穩定性和可靠性。

    事實上,這兩方面研究工作的推進均需解決生物膜內微環境因素的測定問題,以便更為精確的研究生物膜的特征及其演變過程。

     

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